1631112——伯樂Bio-Rad 40% BioLyte® 3/10 兩性電解質(zhì)用戶指南

——為等電聚焦（IEF）提供寬pH范圍線性梯度支持

一、產(chǎn)品概述

伯樂Bio-Rad 40% BioLyte® 3/10 兩性電解質(zhì)（貨號：1631112）是一種高純度、澄清水溶液形式的兩性電解質(zhì)載體，專為等電聚焦（IEF）技術(shù)設(shè)計。其核心功能是通過 可逆質(zhì)子化/去質(zhì)子化 形成穩(wěn)定的線性pH梯度，幫助分離等電點（pI）差異微小的蛋白質(zhì)。該產(chǎn)品以 40%濃度、10 mL規(guī)格 提供，pH范圍覆蓋 3.5–9.5，適用于寬跨度蛋白質(zhì)組學(xué)研究。

二、核心參數(shù)與特性

產(chǎn)品優(yōu)勢：

1. 寬pH梯度：覆蓋多數(shù)蛋白質(zhì)的pI范圍，適用于初步分離。

2. 高重復(fù)性：線性梯度穩(wěn)定，確保實驗結(jié)果一致性。

3. 兼容性強(qiáng)：與ReadyStrip™ IPG膠條、Bio-Rad電泳系統(tǒng)無縫集成。

4. 純度高：不含DNase和RNase，避免核酸污染。

三、應(yīng)用場景

1. 蛋白質(zhì)組學(xué)研究

• 分離血清、細(xì)胞裂解液等復(fù)雜樣本中的蛋白質(zhì)，為疾病機(jī)制研究提供數(shù)據(jù)支持。

2. 單克隆抗體純化

• 在生物制藥中用于抗體等電點分離，提高純化效率。

3. 疾病標(biāo)志物檢測

• 助力醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域蛋白質(zhì)標(biāo)志物篩查，提升診斷準(zhǔn)確性。

4. 污染物降解酶分離

• 在環(huán)保領(lǐng)域用于分離具有特定降解活性的酶類。

四、操作指南

（一）樣本準(zhǔn)備

1. 樣品類型：

• 蛋白質(zhì)溶液、細(xì)胞裂解液、血清、組織勻漿等。

2. 預(yù)處理：

• 確保樣品無沉淀，pH值接近中性（7.0–8.0）。

（二）IEF實驗流程

1. 膠條預(yù)處理：

• 將ReadyStrip™ IPG膠條（如pH 3–10）在平衡液中浸泡10–15分鐘。

2. 樣品混合：

• 將樣品與BioLyte® 3/10按1:1（v/v）比例混合，總體積不超過膠條承載量。

3. 膠條加載：

• 將混合液均勻涂布于膠條表面，避免氣泡。

4. 等電聚焦：

• 被動水化：12小時（20°C）；

• 主動聚焦：3000–8000 Vh（根據(jù)膠條長度調(diào)整）。

• 使用Bio-Rad PROTEAN® IEF Cell系統(tǒng)，按以下參數(shù)運行：

（三）后續(xù)處理

1. 平衡：

• 聚焦后，將膠條在平衡液中平衡兩次（每次15分鐘）。

2. 第二向電泳：

• 將膠條轉(zhuǎn)移至SDS-PAGE凝膠上進(jìn)行分離。

3. 染色與分析：

• 使用考馬斯亮藍(lán)或銀染法顯影，結(jié)合軟件分析蛋白質(zhì)圖譜。

五、注意事項

1. 儲存條件：

• 開封后需密封保存于2–8°C，避免反復(fù)凍融。

2. pH范圍選擇：

• 若需更高分辨率，可結(jié)合窄跨度BioLyte®（如pH 4–6、5–7）進(jìn)行分段聚焦。

3. 避免污染：

• 使用無菌移液器操作，防止微生物或核酸污染。

4. 設(shè)備兼容性：

• 僅適用于Bio-Rad IEF系統(tǒng)及兼容的電泳槽。

5. 廢棄處理：

• 使用后的膠條及溶液需按實驗室生物廢棄物規(guī)定處理。